大鼠Ⅰ型膠原交聯羧基末端肽 （ELISA）試劑盒

 ELISA試劑盒在國內有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等。

  ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內生化領域的長足發展。

用途

ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。

如何操作

雙抗體夾心法

1. 包被：用 0.05MPH 稀釋抗體至 1-10 μg/ml 的蛋白質含量。 9. Oxycarbonate 包被緩沖液。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加入 0.1 ml，在 4°C 下過夜。次日，棄孔中的溶液，用洗滌緩沖液洗滌3次，每次3分鐘。 （簡稱洗滌，下同）。

2、加樣：將0.1ml稀釋的待測樣品加入上述包被的反應孔中，37℃孵育1小時。然后洗。 （同時制作空白孔、陰性對照孔和陽性對照孔）。

3. 加入酶標抗體：每反應孔加入0.1ml新鮮稀釋的酶標抗體（滴定后稀釋）。在 37°C 下孵育 0.5 至 1 小時并洗滌。

4加入底物顯色液：在每個反應孔中加入0.1ml臨時配制的TMB底物溶液，37℃孵育10-30分鐘。

5. 反應終止：向每個反應孔中加入 0.05ml 2M 硫酸。

6、結果判斷：在白色背景下，可以用肉眼直接觀察結果：反應孔顏色越深，陽性程度越強，陰性反應無色或極淺。 “-"符號表示。 OD值也可以測量：在ELISA檢測器上，在450nm（ABTS用于顯色時為410nm），用空白對照孔調零后測量各孔的OD值，如果大于OD值的2.1倍的陰性對照，即陽性。

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