?ELISA實驗過程中需要注意什么

1.樣本處理
首先對于ELISA來說，正確的處理樣本是保證檢測準(zhǔn)確性和正確性的第一步。
正式實驗之前最好使用少量的樣本進行預(yù)實驗，可以選擇2、5、10倍稀釋樣本，選擇合適的稀釋比例進行實驗，親身經(jīng)歷告訴大家，千萬不能圖省事，不然濃度太大超過檢測限，簡直就是賠了夫人又折兵！！！同時，樣本的保存也非常重要，保存不當(dāng)或在冰箱里保存過久的樣本，血清中l(wèi)gG可聚合成多聚體，導(dǎo)致結(jié)果偏高。建議五天內(nèi)檢測的血清樣本可短暫存放4℃，一周之后測定的血清樣本應(yīng)該低溫凍存，同時切忌反復(fù)凍融。如果是血清樣本，也要主要樣本不能有溶血、脂血和細菌等殘留，這些樣本中存在非特異性顯色影響結(jié)果。                                                                                                 2.標(biāo)準(zhǔn)品如何使用
標(biāo)準(zhǔn)品的配置一般都是按照說明書進行的倍比稀釋，很多廠家提供的盒子里標(biāo)準(zhǔn)品是凍干粉，同時要求每次使用新的凍干標(biāo)準(zhǔn)品，那重復(fù)使用是否會有影響呢？這里我又很有經(jīng)歷的含淚告訴大家，咨詢過國產(chǎn)D牌的技術(shù)支持，建議是如果非用不可，那么標(biāo)準(zhǔn)品打開后一定要注意保存，且盡量不要相隔太久。我也曾經(jīng)試過，冬天放置一周的標(biāo)準(zhǔn)品，再次使用差別不大，但是放太久的標(biāo)準(zhǔn)品建議狠心丟掉，不要使用。因此小伙伴們設(shè)計實驗一定要充分，盡量備好樣本再進行操作！     3.操作過程需牢記
首先，實驗進行前要先將試劑盒從冰箱中恢復(fù)室溫。
加樣時盡量將液體加入孔底，不要有氣泡，提供一個小tip!因為有氣泡會影響吸光度值的測定，檢測之前可以使用小槍頭很容易戳破氣泡。
洗板時注意不要間隔太久，盡量避免干板現(xiàn)象！
按照試劑盒批號和保質(zhì)期使用，不同批次的試劑嚴禁混合使用，同時試劑盒使用后剩余的孔板一定要和干燥劑一起保存，防止潮濕。
目的蛋白含量低的樣本可以咨詢廠家是否可以適當(dāng)延長孵育時間，使其充分結(jié)合。（本人使用不同廠家的試劑盒要求是不同的，有需要嚴格按照說明時間進行，防止非特異性結(jié)合，因此小伙伴們還是要多咨詢一下！）